1. 基本說(shuō)明

DB3.1大腸桿菌菌株基因組中含有g(shù)yrA462基因，賦予其對(duì)ccdB毒性基因的抗性，特別適用于構(gòu)建或擴(kuò)繁含有ccdB基因的質(zhì)粒載體(例GATEWAY System vector)，此菌株具有鏈霉素抗性。DB3.1感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108 cfu/μg DNA。

2. 基因型

F- gyrA462 endA1 glnV44 Δ(sr1-recA) mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) ara14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 (SmR) xyl5Δleu mtl1

3. 儲(chǔ)存及使用環(huán)境

本產(chǎn)品應(yīng)保存在-80℃，不可反復(fù)凍融或放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。進(jìn)行轉(zhuǎn)化過(guò)程中，請(qǐng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。

4. 操作方法

1. DB3.1感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

5. 注意事項(xiàng):

1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入目的DNA時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。