cDNA末端快速克隆

服務(wù)內(nèi)容：

本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過八年反復(fù)專研，獨(dú)創(chuàng)了一套獨(dú)特的技術(shù)應(yīng)用于5'RACE和3'RACE的擴(kuò)增。多年的RACE實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，RACE作為本公司的核心技術(shù)項(xiàng)目之一，我們有信心能為您獲得幾乎任何一個(gè)cDNA的全長序列。

請?jiān)诰€咨詢或直接聯(lián)系17720555749

技術(shù)簡介

        RACE(rapid-amplification of cDNA ends)，即cDNA末端快速克隆技術(shù)，是一種基于PCR從低豐度的轉(zhuǎn)錄本中快速擴(kuò)增cDNA的5'和3’末端的有效方法。相比于其他獲得新基因的方法，RACE原理簡單、無需建立文庫、快速廉價(jià)，正受到越來越多科研工作者的重視。


技術(shù)原理
        RACE基于PCR技術(shù)基礎(chǔ)之上，先由RT-PCR從RNA中獲取cDNA片段，再通過設(shè)計(jì)引物向兩端延伸PCR擴(kuò)增獲得完整的3'端或5'端序列，是一種從低豐度的轉(zhuǎn)錄本中快速擴(kuò)增cDNA的5'和3’末端的有效方法。 


3'末端RACE

        利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作為一個(gè)引物結(jié)合位點(diǎn)，以連有SMART寡核苷酸序列通用接頭引物的Oligo（dT）30MN作為鎖定引物反轉(zhuǎn)錄合成標(biāo)準(zhǔn)第一鏈cDNA。然后用一個(gè)基因特異引物作為上游引物，用一個(gè)含有部分接頭序列的通用引物作為下游引物，以cDNA第一鏈為模板，進(jìn)行PCR循環(huán)，把目的基因3' 末端的DNA片段擴(kuò)增出來（圖1）。

5'末端RACE    

        利用一條基因特異性反轉(zhuǎn)錄引物，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA第一鏈，將RNA-DNA雜合鏈中的RNA降解純化后，利用末端轉(zhuǎn)移酶在cDNA鏈的3’端加入PolyC尾巴，然后利用錨定引物和一條基因特異性引物擴(kuò)增（圖2）。



服務(wù)內(nèi)容



技術(shù)流程



樣品與實(shí)驗(yàn)結(jié)果


注：

1. 請保證材料或者總RNA新鮮，如果基因的含量較低或者未知序列較長，樣品量需相應(yīng)增加；

2. 我們會根據(jù)已知序列進(jìn)行特異性擴(kuò)增，如果得不到目的序列或?yàn)榉悄康幕虻男蛄?，我們將停止?shí)驗(yàn)并收取實(shí)驗(yàn)成本費(fèi)用；如果得到序列與您提供的序列有個(gè)別堿基不符，我們在征求您的意見后決定是否進(jìn)行RACE實(shí)驗(yàn)；

3. 我們將設(shè)計(jì)跨內(nèi)含子引物PCR檢驗(yàn)基因表達(dá)水平，如果經(jīng)驗(yàn)證，樣品中基因表達(dá)含量低時(shí)，我們將與您溝通后，決定下一步實(shí)驗(yàn)使用的方法；

4. 對于原核生物RNA 我們僅進(jìn)行5' RACE。


實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖片示例



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