DNA樣本經過亞硫酸氫鹽處理后,用PCR擴增目的片段,并對PCR產物進行測序,將序列與未經處理的序列進行比較,判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化。操作方法可靠,且精確度高,能明確目的片段中每一個CpG位點的甲基化狀態(tài)。
技術簡介
DNA甲基化是最早發(fā)現的基因表觀修飾方式之一,真核生物中的甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶(C),即在DNA甲基化轉移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5’端的胞嘧啶轉變?yōu)榧谆奏?。DNA甲基化通常抑制基因表達,去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。這種DNA修飾方式在不改變基因序列前提下實現對基因表達的調控, 這種DNA修飾的方式在脊椎動物的胚胎發(fā)育過程中起著重要的調控作用,參與多種疾病包括各種腫瘤的發(fā)病機理,是目前表觀遺傳學研究的熱點。
以重亞硫酸鹽處理基因組DNA,發(fā)生甲基化的胞嘧啶不變,而未甲基化的胞嘧啶會變成尿嘧啶,經過PCR擴增,原本的C/G就變成T/A,可以通過測序區(qū)分。
DNA甲基化檢測實驗流程長,操作煩瑣,不易控制;亞硫酸氫鈉處理、DNA定量、PCR引物設計、PCR擴增條件的選擇都需要非常豐富的實驗經驗。
適用領域
DNA甲基化是最常見的復制后及轉錄后修飾方式之一,在基因表達調控、發(fā)育調節(jié)、基因組
印跡等方面發(fā)揮重要作用,當前熱門的應用有:
1. 基因甲基化與單親遺傳病
2. 基因甲基化與單親遺傳病
3. 基因甲基化與老化
服務內容
服務流程
樣品與實驗結果
實驗結果示例